Посев кала на дисбактериоз инвитро

При обнаружении роста нормальной или условно-патогенной флоры в низком титре и не имеющей диагностического значения определение чувствительности к антибиотикам/бактериофагам не проводится.

Микробиоцеоз – это сообщество микроорганизмов, обитающих на территориально ограниченном участке с однородными условиями жизни. Бактерии нормальной кишечной флоры живут, прикрепляясь к кишечной стенке и образуя пленку, покрывающую кишечник изнутри. Через эту пленку происходит все всасывание в кишечнике. Бактерии нормальной кишечной микрофлоры обеспечивают по совокупности 50 – 80% всего пищеварения, а также выполняют защитные функции, нейтрализуют действие чужеродных и гнилостных бактерий.

Бифидобактерии. Это основные представители нормальной кишечной микрофлоры, количество которых в кишечнике должно быть 95 – 99%. Бифидобактерии выполняют важную работу по расщеплению, перевариванию и всасыванию различных компонентов пищи, например, углеводов; они сами синтезируют витамины, а также способствуют усвоению их из пищи. При участии бифидобактерий происходит всасывание в кишечнике железа, кальция и других важных микроэлементов; нейтрализуют различные токсические вещества. В бланке анализа указывается титр бифидобактерий, который должен быть не меньше 107 – 108. Существенное снижение количества бифидобактерий – признак выраженного дисбактериоза.

Лактобактерии (лактобациллы, молочнокислые микробы, молочнокислые стрептококки).

Второй по представительству (5% в совокупности микроорганизмов кишечника) и по значимости представитель нормальной флоры. Лактобактерии или молочнокислые микробы вырабатывают молочную кислоту – важнейший компонент для нормальной работы кишечника. В результатах исследования их количество должно быть не меньше 106 – 107. Дефицит лактобактерий может привести к развитию аллергических заболеваний, запоров, лактазной недостаточности.

Кишечная палочка с нормальной ферментативной активностью (эшерихии).

Третий представитель нормальной флоры. Количество кишечной палочки среди других бактерий не превышает 1%, но роль ее очень важна. Во-первых, кишечная палочка является главным конкурентом условно-патогенной флоры, препятствуя заселению чужеродными микробами кишечной стенки; во-вторых, кишечная палочка забирает из просвета кишечника кислород, который является ядом для бифидобактерий и лактобактерий. Снижение общего количества кишечной палочки может быть признаком присутствия в кишечнике небактериальных паразитов (глистов, простейших, которые также нуждаются в кислороде, обделяя им кишечную палочку). Кишечная палочка со сниженной ферментативной активностью. Это неполноценная кишечная палочка, которая не представляет никакого вреда, но при этом не выполняет своих полезных функций. Присутствие данного показателя в анализе является признаком начинающегося дисбактериоза, а также как и снижение общего количества может быть косвенным признаком присутствия в кишечнике глистов или простейших.

В некоторых анализах описываются бактероиды, роль которых неясна, но известно, что это – не вредные бактерии, обычно их количество не имеет практического значения. Все остальные показатели микрофлоры являются условно-патогенной флорой. Они становятся патогенными (нарушающими нормальные функции кишечника) при определенных условиях: повышение их абсолютного количества или снижении функции иммунной системы.

Условно-патогенная флора – это лактозонегативные энтеробактерии (клебсиелла, протей, цитробактеры, энтеробактеры, гафнии, серрации), гемолизирующая кишечная палочка и различные кокки (энтерококки, эпидермальные или сапрофитные стафилококки, золотистый стафилококк). Кроме того, к условно-патогенным относятся клостридии, которые высеваются не во всех лабораториях. Условно-патогенная флора внедряется, конкурируя с полезными бактериями, в микробную пленку кишечника, заселяет кишечную стенку и вызывает нарушения работы всего желудочно-кишечного тракта. Дисбактериоз кишечника с повышенным содержанием условно-патогенной флоры может сопровождаться аллергическими кожными реакциями, нарушениями стула (запоры, поносы, зелень и слизь в кале), болями в животе, вздутиями живота, срыгиваниями, рвотами.

Кокковые формы в общей сумме микробов. Самыми безобидными представителями условно-патогенной флоры являются энтерококки. Они наиболее часто встречаются в кишечнике у здоровых людей, их количество до 106 — 107 не представляет угрозы здоровью. Если количество превышает 25% (более 107), это чаще всего связано со снижением нормальной флоры. Эпидермальный (или сапрофитный) стафилококк (S. epidermidis, S. saprophyticus). Эти виды стафилококков могут вызывать нарушения, но их количество до 104 является допустимым. Золотистый стафилококк (S. aureus). Один из самых неприятных (наряду с гемолизирующей кишечной палочкой, протеем и клебсиеллой) представителей условно-патогенной флоры. Даже небольшие его количества могут вызвать выраженные клинические проявления, особенно у детей первых месяцев жизни. Поэтому обычно в нормах, приведенных в бланке анализа, указывается, что его быть не должно (на самом деле допустимы количества, не превышающие 103). Патогенность золотистого стафилококка напрямую зависит от состояния нормальной флоры: чем больше бифидобактерий, лактобактерий и нормальной кишечной палочки, тем меньше вреда от стафилококка.

Гемолизирующая кишечная палочка. Является представителем лактозонегативных энтеробактерий, но выделяется отдельно в связи с распространенностью и значимостью. В норме должна отсутствовать. К данному микробу применимо практически все, сказанное про золотистый стафилококк. То есть, она может вызывать аллергические и кишечные проблемы, очень распространена в окружающей среде (правда, практически никогда не встречается в грудном молоке), вызывает проблемы у ослабленных детей, требует иммунокоррекции. Следует отметить, что термин “гемолизирующая” не означает, что имеется какое-то влияние на кровь. Лактозонегативные энтеробактерии. Большая группа условно-патогенных бактерий большей или меньшей степени патогенности. Их количество не должно превышать (в титрах: 103 – 106 ). Наиболее неприятными бактериями из этой группы являются протей (чаще всего с ними связаны запоры) и клебсиеллы (являются прямыми антагонистами (конкурентами) лактобактерий, что приводит к развитию аллергии и запоров, а также к проявлениям лактазной недостаточности). Часто в бланке анализа указывается общее количество лактозонегативных энтеробактерий (наиболее информативно процентное соотношение), а затем идет расшифровка: клебсиеллы, протей, хафнии, серрации, энтеробактерии и цитробактерии. Обычно какие-то количества этих бактерий постоянно живут в кишечнике, не вызывая проблем. В нормах могут быть указаны цифры от 104 до 105, являющиеся допустимыми.

Грибы рода Candida. Допустимо присутствие до 103. Повышение этого параметра может быть после применения антибиотиков. Если количество грибов повышено, а количество нормальной кишечной флоры резко снижено, при этом отмечается кандидоз (молочница) видимых слизистых оболочек (ротовая полость, половые органы) – это проявления системного кандидоза, то есть имеется инфицирование грибами кишечника. Если же количество грибов в анализе на дисбактериоз увеличено, но нет снижения нормальной кишечной флоры, это свидетельствует о том, что грибы живут на коже вокруг заднего прохода, а не в кишечнике, в этом случае достаточно наружной терапии с использованием противогрибковых мазей или кремов.

Клостридии. Допустимое количество до 105. Проявляют патогенность обычно в комплексе с другой условно-патогенной флорой, редко изолированно вызывают проблемы (чаще всего – разжижение стула, понос). Их количество зависит от функции местного иммунитета кишечника.

Прочие микроорганизмы. В данном параметре описываются редко встречающиеся виды бактерий, самым опасным из которых является синегнойная палочка (Pseudomonas aerugenosa). Чаще всего, микроорганизмы, описанные в этой позиции, не имеют практического значения. Термин “abs” обозначает отсутствие данного микроорганизма, также употребляется “не обнаружено”.

1. Cбор материала на исследование осуществляется до назначения антибактериальных препаратов и иммуномодуляторов, либо через 10-14 дней после лечения. За 3-4 дня до исследования необходимо отменить прием слабительных препаратов, касторового и вазелинового масел, прекратить введение ректальных свечей. За 1-3 дня до взятия пробы нужно соблюдать диету, исключающую продукты, усиливающие процессы брожения в кишечнике, молочнокислые продукты, алкоголь, антибиотики и бактерийные препараты (содержащие бифидобактерии, лактобактерии, кишечные палочки и т. п.).

2. Кал должен быть получен без применения клизм. Биоматериал собирается при условии самостоятельного опорожнения кишечника.

3. Избегать примеси мочи, отделяемого половых органов, предметов личной гигиены и воды.

4. Биоматериал собирают с чистой и не впитывающей влагу поверхности. Это может быть чистый пакет из полиэтилена, клеенка. Не рекомендуется собирать с пеленки, подгузника (памперса).

5. Допускается использование судна или горшка. Емкость хорошо промывают с мылом, многократно ополаскивают водой, а затем обдают кипятком и остужают.

6. Доставляют в лабораторию в специальном контейнере в течение 2-3-х часов с момента сбора ( хранить в домашних условиях не рекомендуется ).

7. Достаточно для исследования 1-2 чайных ложки биоматериала.

8. Количество контейнеров с калом определяется количеством необходимых позиций (из расчета 1 исследование — 1 контейнер)

В медицинских офисах Москвы и Московской области приём биоматериала для выполнения теста № 456 производится 7 дней в неделю с ограничениями по времени взятия. Интересующую информацию уточняйте у администраторов медицинских офисов.

Определение характера нарушения нормального биоценоза кишечника.

Дисбактериоз (в англоязычной литературе используют термин Intestinal bacterial overgrowth, реже, disbios) острое или хроническое нарушение нормальной микрофлоры кишечника.

В содержимом тощей кишки здоровых людей может находиться до 10 5 бактерий в 1 мл кишечного содержимого. Основными являются молочно-кислые палочки, стафилококки и стрептококки, другие грамположительные аэробные бактерии и грибы. В дистальном отделе подвздошной кишки количество микробов увеличивается до 10 8 , в первую очередь за счёт энтерококков, кишечной палочки, бактероидов и анаэробных бактерий. В толстой кишке преобладают анаэробы (бактероиды, клостридии, лактобациллы). Этот симбиоз бактерий у здорового человека (и у млекопитающих!) выполняет многие полезные функции: противодействует чужеродным патогенным микробам и вирусам, помогает пищеварению, синтезирует витамины группы В.

Соотношение количества различных микроорганизмов достаточно постоянно. Но вследствии ослабления иммунитета, нерациональной терапии антибиотиками, лучевой и химиотерапии, врождённых дефектов ферментов баланс нарушается. Могут исчезнуть некоторые представители нормальной микрофлоры (бифидобактерии, молочнокислые и кишечные палочки) и появиться грибки рода кандида, стафилококки, протей, синегнойная палочка. Возникает клинический синдром, для которого характерны понос, стеаторея, снижение веса и анемия. При резком ослаблении защитных сил, иммунитета может развиться генерализованная форма эндогенной инфекции вплоть до сепсиса.

Выделяемые микроорганизмы и возбудители: полезные бактерии кишечника — лактобактерии, бифидобактерии, кишечные палочки с типичными свойствами, а также со сниженными ферментативными и гемолитическими признаками; условно-патогенные бактерии — энтеробактерии, неферментирующие бактерии, стафилококки, энтерококки, анаэробные бактерии (клостридии, без идентификации до вида), грибы; патогенные — сальмонеллы, шигеллы.

Литература

1. Парфенов А. И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз РМЖ, 1998, т. 6, №18.
2. Henry C. Small Intestinal Bacterial Overgrowth and Irritable Bowel Syndrome JAMA. 2004, v.292, pp. 2213 — 2214.

• Кал должен быть свежесобранным.
• Кал собирается в одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой (его получают в любом медицинском офисе под залог) в количестве не более 1/3 объема контейнера.
• Материал доставляется в медицинский офис в течение 3 часов с момента сбора анализа.
• На контейнере необходимо указать вашу фамилию, инициалы, дату рождения, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком.
• В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность. При стандартном выполнении анализа чувствительность к антибиотикам не проводится.
• Материал после окончания исследования в лаборатории не хранится.

Согласно отраслевому стандарту ОСТ 91500.11.0004-2003, утвержденному МЗ России, рекомендовано обследовать на дисбактериоз лиц, перечисленных ниже, относящихся к группам риска по развитию дисбиоза кишечника:

• новорождённые, у которых нарушению нормофлоры кишечника способствуют следующие факторы: бактериальный вагиноз и мастит у матери, низкая оценка по шкале Апгар и наличие реанимационных мероприятий у новорождённого, позднее прикладывание к груди, длительное пребывание в родильном доме и возможность заселения кишечника агрессивными штаммами микроорганизмов окружающей среды, физиологическая незрелость моторной функции кишечника, наличие малых гнойных инфекций, непереносимость грудного молока, синдром малабсорбции, первичный иммунодефицит;
• дети грудного и раннего возраста в случаях неблагоприятного течения периода новорожденности (в анамнезе), раннего искусственного вскармливания, диспептических нарушений, частых острых респираторно-вирусных инфекций, рахита, анемии, гипотрофии, изменений в психоневрологическом статусе ребёнка, аллергического дерматита;
• дети дошкольного и школьного возраста, находящиеся в замкнутых коллективах, болеющие частыми острыми респираторно-вирусными инфекциями, с аллергическими реакциями;
• в юношеском возрасте имеют значение частые острые респираторно-вирусные инфекции, аллергические реакции, наркомания;
• у взрослых независимо от возраста имеют значение: профессиональные вредности; стрессы; несбалансированное питание; кишечные инфекции; лечение антибактериальными препаратами; длительная гормонотерапия, лечение нестероидными противовоспалительными препаратами; проведение химио- и лучевой терапии у онкологических больных; иммунодефицитные состояния.
• у людей пожилого возраста помимо указанных выше, имеют значение: возрастные изменения свойств микрофлоры (уменьшение канцеролитических свойств кишечной палочки, увеличение числа штаммов, синтезирующих холестерин, увеличение количества гемолитической флоры).

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Дается количественная оценка всех выделенных представителей. Указывается логарифм степени (например, 10 6 кое/грамм в ответе выглядит как цифра 6, 10 3 как цифра 3 и т. д.). Оценить нормальное, сниженное или повышенное содержание микробов можно при сравнении с указанными в бланке ответа референсными значениями.

Проводится лечащим доктором с учётом предрасполагающих факторов, клинических проявлений и анамнеза заболевания. Согласно отраслевому стандарту ОСТ 91500.11.0004-2003 с микробиологической точки зрения принято выделять 3 степени дисбиотического процесса в толстой кишке:

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.05.016.001 “Исследование микробиоценоза кишечника (дисбактериоз) культуральными методами”

Срок выполнения (в лаборатории): 4 р.д. *

Описание

Метод диагностики, заключающийся в определении концентрации аэробных бактерий (кишечная палочка, энтеробактерии, цитробактерии, стафилококки, энтерококки и др.), анаэробных бактерий (бифидобактерии, бактероиды, клостридии) и дрожжеподобных грибов в 1 г исследуемого материала (КОЕ/г).

Дисбактериоз может возникать у практически здоровых людей при нарушениях питания, воздействии профессиональных факторов, сезонных изменений погодных условий, возрастных изменениях, стрессе.

Основными проявлениями дисбактериоза являются: жидкий стул (или запоры), боли и вздутие живота, непереносимость определенных пищевых продуктов, аллергические реакции в виде кожного зуда, крапивницы и отеков. Характерны общее недомогание, отсутствие аппетита, головные боли, повышение температуры, повторные инфекции верхних дыхательных путей. У пациентов с дисбактериозом нарушается всасывание в кишечнике основных пищевых веществ, витаминов и микроэлементов. При резком осложнении защитных сил организма может возникнуть генерализованная инфекция (сепсис), которая может привести к смерти больного.

Показания к назначению

• диагностика дисбактериоза кишечника;
• диагностика антибактериально-ассоциированной диареи;
• оценка эффективности приема пробиотической терапии;
• состояние после курса антибактериальной терапии, приема глюкокортикостероидов, иммунодепрессантов, химитерапевтического лечения.

Подготовка к исследованию

Правила сбора При взятии материала необходимо соблюдать стерильность. До сбора кала помочитесь в унитаз и смойте. Далее, путем естественной дефекации в подкладное судно, соберите испражнения (важно проследить, чтобы не попала моча). Подкладное судно предварительно обрабатывается любым дезинфицирующим средством, тщательно промывается проточной водой несколько раз и ополаскивается кипятком. Кал забирается в контейнер ложечкой в количестве не более 1/3 объема контейнера. Недопустимо попадание в контейнер мочи частичек непереваренной пищи.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Предшествующая антибиотикотерапия может привести к ложноотрицательному результату.

Интерпретация результатов:

Повышение референсных значений: Увеличение количества условно-патогенной флоры, выявление патогенной флоры свидетельствует о дисбиотическом процессе.

Понижение референсных значений: Снижение представителей облигатной флоры (бифидо- и лактобактерий) свидетельствует о дисбиотическом процессе.

Где сдать анализ?

С этой услугой чаще всего заказывают

«>